細胞凍存液的配制可選用10%的DMSO加上90%的小牛血清，可以現(xiàn)用現(xiàn)配。除了這個方式，還可選擇20%的DMSO機上80%的小牛血清，配成兩倍的儲存液，在使用時細胞懸液和凍存液按照1:1的比例混勻使用，特別的方便。凍存液可直接置于-20攝氏度的環(huán)境中保存。使用細胞凍存液需要注意以下幾點：1、在使用凍存液前，需要確保細胞凍存液已經(jīng)完全融化，并要輕輕的混勻。對融化后的細胞凍存液要置于4℃的環(huán)境中保存。2、使用凍存液之前應(yīng)該確保凍存前的細胞生長情況比較良好，比如說細胞需要處于對數(shù)生長期，并且凍存的時候存活率大于90%。3、在使用細胞凍存液期間，為了保證可以發(fā)揮較佳的效果，建議將細胞凍存在液氮之中，這樣可以長時間的進行保存。如果說將細胞置于-80℃的環(huán)境下保存，那么保存的時間大約為1年。4、細胞凍存液如果需要做標記的話，要使用耐受有機溶劑的馬克筆進行標記，以防被酒精或異丙醇等擦掉，不能辨識。鏡檢后，研究者可根據(jù)各自方法和需要來進行細胞培養(yǎng)。上海無血清細胞凍存液銷售廠家

細胞凍存中的注意事項：細胞凍存開始時，要溫好相應(yīng)的培養(yǎng)基和相應(yīng)的試劑，以及計數(shù)耗材，避免操作過程中手忙腳亂。用移液管吹打相應(yīng)的胞液時，要保證移液管在液面以下吹打，管內(nèi)要有液體，防止產(chǎn)生相應(yīng)的氣泡，氣泡的張力會影響細胞的活率和生存狀態(tài)。計數(shù)細胞時要保證取胞液時也要混勻，這個過程比較重要，細胞不混勻，計數(shù)不準，此外吹打應(yīng)該輕柔，避免細胞在吹打的過程中出現(xiàn)了相應(yīng)的死亡。凍存離心用50ml離心管比較好，加凍存液吹打混勻比較方便，離心后不能過多地晃動離心管。當離心管液體較多的時候，可以直接傾倒，不要磕，多余的液體較好用泵吸出比較好。凍存支數(shù)少的情況，用泵頭輕柔吹打，避免出現(xiàn)氣泡，凍存支數(shù)多用移液管吹打。廈門無血清細胞凍存液推薦廠家含血清，細胞污染(細菌、霉菌和支原體等)的風險更高。

無血清快速細胞凍存液凍存細胞復蘇方法：1、從冰箱里取出細胞冷凍保存管，立即放入37℃振動水浴槽中快速解凍。2、待凍存管中細胞混合液完全融化后，立即加入1ml細胞培養(yǎng)基于該冷凍管中與細胞混合，再將細胞混合液從凍存管中移入含有9ml該細胞培養(yǎng)基的試管中，混合均勻。3、離心收集培養(yǎng)細胞（參考離心條件：1,000~2,000rpm，4℃，3~5min），移去上清液。4、清洗細胞，充分洗凈殘留凍存液。5、加入適量的新鮮細胞培養(yǎng)基，使用移液管緩緩地均勻細胞混合液。適量地稀釋后，將細胞混合液移至事先準備好的培養(yǎng)瓶中。6、鏡檢后，研究者可根據(jù)各自方法和需要來進行細胞培養(yǎng)。

對于很多科研汪來說，細胞是脆弱又重要的寶貝之一，承擔著重要的實驗數(shù)據(jù)希望。尤其是在凍存復蘇的時候，經(jīng)常會因為一些小細節(jié)導致問題。比如：沒有控制好細胞的生長密度細胞的密度對細胞的生存質(zhì)量有著重要的影響，畢竟它們是一群又不能擠著了也不能孤獨的嬌貴寶寶。密度過高會讓細胞沒有足夠的生存空間，密度過低會讓細胞無法互相連接健康生長。建議大家在細胞接種前，一定要調(diào)整好適合細胞生長的濃度，提高細胞的存活率。溫度控制不達標慢凍快融是細胞凍存復蘇的*關(guān)鍵詞之一無血清細胞凍存液不含牛血清，無動物源組份。

以前在另一家實驗室的時候，凍存細胞根本就沒有講究這些標準操作。凍存的細胞有293T、PT67、C2C12、MEF(鼠胚胎成纖維細胞）、HelaS3、HelaD、U2OS、HKC、RK3E、ECO、H292、HSY、COS7、SupT1等。將細胞酶消化后直接參與離心，加入凍存液（含90%的血清和10%的DMS0)，直接放在-80℃冰箱。兩三天后移入液氮中，較久保存，幾年后細胞的活力仍沒有什么受損，照常能復蘇，成活率高。但有三點須注意：（1）一是細胞的生長狀態(tài)要好，不能長得過稀，同樣也不能過密，細胞的狀態(tài)看起來相當健康。70%密度的要保存的細胞須再長24h才能全滿，萬一細胞狀態(tài)不好，可以酶消化后再繁殖一次；（2）凍存細胞的量要留心，不能太密也不能太稀，一般1OOmm培養(yǎng)皿的細胞凍存為3~4管；（3）存放在-80℃冰箱的時間不能過長，一兩天后轉(zhuǎn)移到液氮罐里。我們也曾取出存放在-80℃冰箱的細胞，半年還有30%~50%的細胞有活性，但一年的細胞就沒有活的。PH，電解質(zhì)等的改變，進而促使細胞死亡。石家莊正規(guī)無血清細胞凍存液平均價格

在細胞內(nèi)外進行雙重保護，較大提高了細胞復蘇存活率。上海無血清細胞凍存液銷售廠家

無血清細胞凍存液：1.逐滴加入5-7mL的預(yù)熱的培養(yǎng)基到15mL的離心管中，加入的同時輕輕混勻。2.室溫（15-25°C）以300xg離心5分鐘。3.吸出培養(yǎng)基，使細胞沉淀完好無損。使用2mL血清移液管輕輕將細胞沉淀重懸于1mL的培養(yǎng)基中。小心保持細胞作為聚集體。4.將0.5mL的細胞混合物轉(zhuǎn)移到含有培養(yǎng)基的預(yù)包被的6孔板的培養(yǎng)孔中（例如，每個冷凍管可以鋪板兩個孔）。注意：鋪板多少孔可能需要根據(jù)凍存的細胞聚集體數(shù)量進行調(diào)整。通常在復蘇后，要比在常規(guī)的傳代鋪板更多的細胞聚集體數(shù)量。將培養(yǎng)板放入37°C培養(yǎng)箱?？焖偾昂笞笥业膿u晃培養(yǎng)板數(shù)次，將細胞聚集體分布均勻。24小時內(nèi)不要移動培養(yǎng)板。上海無血清細胞凍存液銷售廠家