1.細胞培養(yǎng)基的種類按照細胞培養(yǎng)基的發(fā)展歷史,細胞培養(yǎng)基大致可分為平衡鹽溶液、天然細胞培養(yǎng)基、合成細胞培養(yǎng)基、無血清細胞培養(yǎng)基、限定化學成分細胞培養(yǎng)基等幾大種類。(balancedsaltsolution,BSS)BSS主要是由無機鹽、葡萄糖組成,它的作用是維持細胞滲透壓平衡,保持pH穩(wěn)定及提供簡單的營養(yǎng)。其主要用于細胞的漂洗、配制其他試劑等。幾種常用的BSS配方如下(表1-1)。D-Hank's與Hank's的一個主要區(qū)別是前者不含有Ca2+和Mg2+,因此D-Hank's常用于配制胰酶溶液。因為Ca2+、Mg2+是細胞膜的重要組成成份,參與細胞粘附等功能,使用不含Ca2+、Mg2+的BSS可避免細胞結(jié)團。此外,Hanks液和Earle液是常用的BSS基礎(chǔ)溶液,前者緩沖能力較弱,適合于密閉培養(yǎng);后者緩沖能力較強,適合于5%CO2的培養(yǎng)條件。天然培養(yǎng)基指來自動物體液或利用組織分離提取的一類培養(yǎng)基,如血漿、血清、雞胚浸出液等。其優(yōu)點是營養(yǎng)成分豐富,培養(yǎng)效果良好,但缺點是成分復(fù)雜,來源受限且制作過程復(fù)雜、批間差異大。目前使用的天然培養(yǎng)基是血清,另外各種組織提取液、促進細胞貼壁的膠原類物質(zhì)在培養(yǎng)某些特殊細胞也是必不可少。水解乳蛋白是乳白蛋白經(jīng)蛋白酶和肽酶水解的產(chǎn)物。Eagle培養(yǎng)基由Harry Eagle在Eagle基本培養(yǎng)基(BEM)的基礎(chǔ)上發(fā)展而來的。福建醫(yī)療細胞培養(yǎng)基廠家
其本質(zhì)為含有鹽、氨基酸、維生素和其他必需營養(yǎng)物的pH緩沖的等滲混合物。在此基礎(chǔ)上,DMEM、IMDM、HAMF12、PRMI1640等各種合成細胞培養(yǎng)基被不斷開發(fā)出來。常用合成培養(yǎng)基的配方此處不詳細介紹。MEM(MinimalEssentialMedium)培養(yǎng)基MEM(MinimalEssentialMedium)培養(yǎng)基有含Earle's平衡鹽的類型,也有含Hanks'平衡鹽的類型;有高壓滅菌型的,也有過濾除菌型的;還有含非必需氨基酸的類型。是基本、適用范圍廣的細胞培養(yǎng)基。DMEM細胞培養(yǎng)基DMEM(Dulbecco’smodifiedMinimalEssentialMedium)是由Dulbecco在MEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上改良獲得的,各成分份量加倍,分低糖(1000mg/L)、高糖(4500mg/L)兩種類型。細胞生長快。附著稍差的腫瘤細胞、克隆培養(yǎng)用高糖效果較好,常用于雜交瘤的骨髓瘤細胞和DNA轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)化細胞培養(yǎng)。IMDM細胞培養(yǎng)基IMDM(Iscove’smodifiedDMEM)是由Iscove在DMEM基礎(chǔ)上改良,增加了幾種氨基酸和胱氨酸量等??捎糜陔s交瘤細胞培養(yǎng),以及無血清培養(yǎng)的基礎(chǔ)細胞培養(yǎng)基。RPMI-1640細胞培養(yǎng)基專門針對淋巴細胞培養(yǎng)設(shè)計,含有BSS、21種氨基酸、維生素等,適于多種正常細胞和腫瘤細胞的培養(yǎng),也用做懸浮細胞培養(yǎng)。HamF12細胞培養(yǎng)基含微量元素。遼寧華晨陽細胞培養(yǎng)基廠家TNM-FH昆蟲培養(yǎng)基可用于各種鱗翅類昆蟲細胞的培養(yǎng)。含有多類細胞培養(yǎng)所需的氨基酸、無機鹽等多種成分。
1640是培養(yǎng)基代號。RPMI-1640是改進型的McCoy‘s5A培養(yǎng)基,使用碳酸氫鹽緩沖系統(tǒng),與大多數(shù)哺乳動物細胞培養(yǎng)基不同的是其典型的PH8的配方。RPMI-1640培養(yǎng)基常初是為淋巴細胞培養(yǎng)專門設(shè)計的,現(xiàn)在已廣泛應(yīng)用于各種正常細胞和ai細胞的培養(yǎng),包括HeLa細胞、Jurkat細胞、MCF-7細胞、PC12細胞、PBMC細胞、星形膠質(zhì)細胞和ai細胞,是使用常為廣的培養(yǎng)基之一。
針對廣的細胞培養(yǎng)應(yīng)用,我們提供多種組分的RPMI1640改良培養(yǎng)基。
RPMI-1640細胞培養(yǎng)基L-谷氨酰胺(Glutamine)是細胞培養(yǎng)中所必需的一種營養(yǎng)元素,但其在溶液中不穩(wěn)定,會自發(fā)降解,不含L-谷氨酰胺的培養(yǎng)基,可以根據(jù)研究需要任意調(diào)整L-谷氨酰胺的用量,在使用時添加新鮮的L-谷氨酰胺或其替代物更利于細胞的生長。
Leibovitz’sL-15培養(yǎng)基的緩沖系統(tǒng)由磷酸鹽和游離堿基氨基酸組成,代替了傳統(tǒng)的碳酸氫鈉緩沖系統(tǒng),同時,用半乳糖和**酸鈉代替葡萄糖可以防止酸性代謝副產(chǎn)物的形成,有助于維持培養(yǎng)液PH的穩(wěn)定,適合用于非CO2平衡環(huán)境的細胞培養(yǎng)。Leibovitz’sL-15培養(yǎng)基適用于猴腎細胞和HEP-2的培養(yǎng)、原代(如胚胎和成人組織)細胞分離、多種病毒的培養(yǎng)以及神經(jīng)元的培養(yǎng)等。青霉素-鏈霉素混合液通常也被稱為“雙抗”,是體外培養(yǎng)中為預(yù)防微生物污染常用的***,其中,青霉素能夠干擾細菌細胞壁的合成,對革蘭陽性菌特別有效;而鏈霉素能夠與細菌核糖體30S亞單位結(jié)合,抑制細菌蛋白質(zhì)的合成,對革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌均有效,但對革蘭氏陰性菌特別有效。青霉素和鏈霉素聯(lián)合使用可以預(yù)防絕大部分的細菌污染。本產(chǎn)品含有多類細胞培養(yǎng)所需的氨基酸、維生素、無機鹽等多種成分,但不含蛋白質(zhì)、脂類或任何生長因子,故此產(chǎn)品需搭配血清或無血清添加物使用。 M199全稱Medium 199,廣泛應(yīng)用于各種動物細胞的培養(yǎng),包括一些非哺乳類動物細胞。
Dulbecco’s改良培養(yǎng)基–DMEM(Dulbecco’sModifiedEagleMedium)是在MEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上研制的,與MEM培養(yǎng)基相比,氨基酸的含量增加了2倍,維生素的含量增加了4倍,同時還增加了非必須氨基酸、微量鐵離子等。DMEM培養(yǎng)基初設(shè)計葡萄糖含量為1000mg/L(低糖型),后來又發(fā)展出葡萄糖含量為4500mg/L(高糖型),現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于各種細胞的培養(yǎng)。青霉素-鏈霉素混合液通常也被稱為“雙抗”,其中,青霉素能夠干擾細菌細胞壁的合成,對革蘭陽性菌特別有效;而鏈霉素能夠與細菌核糖體30S亞單位結(jié)合,抑制細菌蛋白質(zhì)的合成,對革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌均有效,但對革蘭氏陰性菌特別有效。青霉素和鏈霉素聯(lián)合使用可以預(yù)防絕大部分的細菌污染。本產(chǎn)品含有多類細胞培養(yǎng)所需的氨基酸、維生素、無機鹽等多種成分,但不含蛋白質(zhì)、脂類或任何生長因子,故此產(chǎn)品需搭配血清或無血清添加物使用。 DMEM 含多種無機鹽,維持細胞內(nèi)外滲透壓與離子平衡 。廣東昆蟲細胞培養(yǎng)基源頭直供
MCDB 131培養(yǎng)基不同于傳統(tǒng)培養(yǎng)基之處在于,其含有微量元素、腐胺、腺嘌呤及更高濃度的氨基酸和維生素。福建醫(yī)療細胞培養(yǎng)基廠家
干細胞研究同樣與 DMEM 培養(yǎng)基緊密相連。DMEM 培養(yǎng)基能夠為干細胞群體的維持和擴增提供適宜環(huán)境。以胚胎干細胞為例,高糖型 DMEM 培養(yǎng)基憑借充足的能量供應(yīng),助力胚胎干細胞保持良好的生長狀態(tài),維持其多能性。在誘導(dǎo)干細胞分化為特定細胞類型時,科研人員可根據(jù)需求對 DMEM 培養(yǎng)基進行優(yōu)化,添加特定的生長因子等成分,引導(dǎo)干細胞向目標細胞分化。比如,在神經(jīng)干細胞向神經(jīng)元細胞分化的研究中,通過調(diào)整 DMEM 培養(yǎng)基成分,促進神經(jīng)干細胞的分化進程,為神經(jīng)再生醫(yī)學研究奠定基礎(chǔ)。福建醫(yī)療細胞培養(yǎng)基廠家
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