DNA探針(DNA probe)是**常用的核酸探針,為長度在幾十到幾百甚至上千堿基對的單鏈或雙鏈DNA,用特殊示蹤劑(如同位素、酶或有色基團)進行標記;在適當?shù)膒H值、溫度和離子強度下,DNA探針利用分子的變性、復性以及堿基互補配對的高度精確性,能與待測樣本中互補的非標記單鏈DNA或RNA以氫鍵結合(雜交),形成雙鏈復合物(雜交體)。雜交體的穩(wěn)定性取決于兩條單鏈核苷酸之間的互補程度。在嚴格的條件下(高pH值、高溫、低離子強度),不完全匹配的雜交體的兩鏈將會解離,而完全匹配的雜交體將保持雙鏈。將未配對結合的探針洗去后,可用放射自顯影或酶聯(lián)反應等檢測系統(tǒng)檢測雜交反應結果。能兼作透射電鏡、能進行電子衍射、能作電子熒光觀察等。靜安區(qū)標準探針五星服務
電子探針(Electron Probe Microanalysis)是一種利用電子束作用樣品后產生的特征X射線進行微區(qū)成分分析的儀器, [1]可以用來分析薄片中礦物微區(qū)的化學組成。除H、He、Li、Be等幾個較輕元素外,還有U元素以后的元素以外都可進行定性和定量分析。電子探針的大批量是利用經過加速和聚焦的極窄的電子束為探針,激發(fā)試樣中某一微小區(qū)域,使其發(fā)出特征X射線,測定該X射線的波長和強度,即可對該微區(qū)的元素作定性或定量分析。電子探針顯微分析原理及其發(fā)展的初期是建立在X射線光譜分析和電子顯微鏡這兩種技術基礎上的,該儀器實質上就是這兩種儀器的科學組合。靜安區(qū)標準探針五星服務電子探針的構成除了與掃描電鏡結構相似的主機系統(tǒng)以外,還主要包括分光系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)等部分。
該系統(tǒng)為電子探針分析提供具有足夠高的入射能量,足夠大的束流和在樣品表面轟擊殿處束斑直徑近可能小的電子束,作為X射線的激發(fā)源。為此,一般也采用鎢絲熱發(fā)射電子槍和2-3個聚光鏡的結構。 為了提高X射線的信號強度,電子探針必須采用較掃描電鏡更高的入射電子束流(在10-9-10-7A范圍),常用的加速電壓為10-30 KV,束斑直徑約為0.5μm。電子探針在鏡筒部分與掃描電鏡明顯不同之處是由光學顯微鏡。它的作用是選擇和確定分析點。其方法是,先利用能發(fā)出熒光的材料(如ZrO2)置于電子束轟擊下,這是就能觀察到電子束轟擊點的位置,通過樣品移動裝置把它調到光學顯微鏡目鏡十字線交叉點上,這樣就能保證電子束正好轟擊在分析點上,同時也保證了分析點處于X射線分光譜儀的正確位置上。在電子探針上大多使用的光學顯微鏡是同軸反射式物鏡,其優(yōu)點是光學觀察和X射線分析可同時進行。放大倍數(shù)為100-500倍。
進行分子突變需要大量的探針拷貝,后者一般是通過分子克隆(molecular cloning)獲得的??寺∈侵赣脽o性繁殖方法獲得同一個體、細胞或分子的大量復制品。當制備基因組DNA探針前,應先制備基因組文庫,即把基因組DNA打斷,或用限制性酶作不完全水解,得到許多大小不等的隨機片段,將這些片段體外重組到運載體(噬菌體、質粒等)中去,再將后者轉染適當?shù)乃拗骷毎绱竽c肝菌,這時在固體培養(yǎng)基上可以得到許多攜帶有不同DNA片段的克隆噬菌斑,通過原位雜交,從中可篩出含有目的基因片段的克隆,然后通過細胞擴增,制備出大量的探針。分析對象是固體物質表面細小顆粒或微小區(qū)域,小范圍直徑為1μm。
3 面分析用于測定某種元素的面分布情況。方法是將X射線譜儀固定在所要測量的某元素特征X射線信號的位置上,電子束在樣品表面做光柵掃描,此時在熒光屏上便可看到該元素的面分布圖像。顯像管的亮度由試樣給出的X射線強度調制。圖像中的亮區(qū)表示這種元素的含量較高。定量分析定量分析時,先測得試樣中Y元素的特征X射線強度IY,再在同一條件下測出已知純元素Y的標準試樣特征X射線強度IO。然后兩者分別扣除背底和計數(shù)器死時間對所測值的影響,得到相應的強度值IY和IO,兩者相除得到X射線強度之比KY= IY / IO。 直接將測得的強度比KY當作試樣中元素Y的重量濃度,其結果還有很大誤差,通常還需進行三種效應的修正。即原子序數(shù)效應的修正,吸收效應修正,熒光效應修正。經過修正,誤差可控制在±2%以內。分析元素從原子序數(shù)3(鋰)至92(鈾)。感量可達10-14至10-15g。靜安區(qū)標準探針五星服務
電子探針是運用電子所形成的探測針(細電子束)作為X射線的激發(fā)源來進行顯微X射線光譜分析的儀器。靜安區(qū)標準探針五星服務
X射線譜儀能譜儀電子束轟擊樣品表面將產生特征X射線,不同的元素有不同的X射線特征波長和能量。通過鑒別其特征波長或特征能量就可以確定所分析的元素。利用特征波長來確定元素的儀器叫做波長色散譜儀(波譜儀),利用特征能量的就稱為能量色散譜儀(能譜儀)。1、波譜儀波譜儀的關鍵在于怎樣實現(xiàn)將未知的特征譜線與已知元素Z聯(lián)系起來?為此設想有一種晶面間距為d的特定晶體(我們稱為分光晶體),當不同特征波長λ的X射線照射其上時,如果滿足布拉格條件(2dsinθ=λ)將產生衍射。顯然,對于任意一個給定的入射角θ*有一個確定的波長λ滿足衍射條件。靜安區(qū)標準探針五星服務
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